تاثیر پی آر پی بر تولید کلاژن!!!

شواهد بافت شناسی از فرمول کلاژن جدید با استفاده از پلاسمای غنی از پلاکت در جوان سازی پوست: یک مطالعه بالینی کنترل شده آینده نگر در مورد تاثیر پی آر پی بر تولید کلاژن

زمینه

پلاسمای غنی از پلاکت (PRP) یک غلظت اتولوگ پلاکت های انسانی است که در حجم کمی از پلاسما موجود است و اخیراً نشان داده شده است که جوانسازی پوست پیر را توسط فاکتورهای مختلف رشد و مولکولهای چسبندگی سلول تسریع می کند.

هدف، واقعگرایانه

این مطالعه به منظور ارزیابی اثربخشی و ایمنی تزریق داخل بدن از PRP در جوان سازی صورت انسان انجام شد.

مواد و روش ها

این مطالعه یک مطالعه بالینی آینده نگر، تک مرکز، تک دوز، برچسب باز، کنترل بالینی غیر تصادفی است. PRP به قسمت فوقانی این ناحیه مادون قرمز راست و تمام صورت تزریق می شود. سالین به ناحیه مادون قرمز تزریق شد. معاینات بافت شناسی قبل از درمان PRP ، 28 روز پس از PRP و تیمارهای شور (شاهد) انجام شد.

نتایج

20 زن در محدوده سنی 40 تا 49 سال (میانگین سنی 43/2 65 65/43) 43 سال) در مطالعه شرکت کردند. میانگین تراکم نوری (MOD) کلاژن در منطقه قبل از درمان، کنترل و PRP تحت اندازه گیری قرار گرفت. آنها به ترتيب 2/93 ± 539، 5/134 7، 787 ، 178 1، 019 بودند. در MOD از PRP ، 89/05 درصد بهبود زمانی پیدا شد که MOD از PRP با MOD پیش درمانی مقایسه شد. میانگین MOD الیاف کلاژن به وضوح بالاترین در سمت PRP بود (P <0.001). نسبت بهبود PRP به شور (05/89 درصد به 01/46 درصد) 1.93: 1 بود. هیچ عارضه جانبی جدی مشاهده نشد.

مقدمه

پلاسمای غنی از پلاکت (PRP) در طی چند سال گذشته به عنوان یک درمان مؤثر در زمینه های مختلف پزشکی و جراحی مورد استفاده قرار گرفته است. نشریاتی در مورد استفاده از PRP در درمان زخم، جراحی فک و صورت، جراحات بافت نرم، جراحی پریودنتال و دهان، جراحی ارتوپدی و تروما، جراحی های دستگاه گوارش، سوختگی، جراحی زیبایی و پلاستیک وجود دارد. PRP به طور خاص توجه متخصصین پوست را در زمینه زیبایی شناسی برای جوان سازی پوست به خود جلب کرده است.

PRP حاوی غلظت بالایی از ترومبوسیت ها (پلاکت ها) است. فاکتورهای رشد متعددی در دانه های α- پلاکت ها وجود دارد که پس از فعال شدن پلاکت ها توسط مبتکران تجمع ترشح می شوند. چندین فاکتور رشد و سایتوکاین ها در فرآیند تحریک سنتز کلاژن فیبروبلاست فعالیت می کنند.

تا به امروز، تقریباً تمام مطالعاتی که در مورد تأثیر PRP بر عملکرد سلولی مانند عملکرد فیبروبلاست، که داده های مهمی را برای کاربردهای بالینی ارائه می دهند، حاصل شده اند، نتایج دلگرم کننده ای را به دست آورده اند. با این حال، بسیاری از آنها در مورد اثر PRP در تکثیر فیبروبلاست، در شرایط آزمایشگاهی (در سلولهای کشت یافته) گزارش شده است.

برای روشن شدن اثربخشی بالینی PRP، با ارزیابی کلاژن (در داخل بدن)، تاثیر پی آر پی بر تولید کلاژن لازم است مورد بررسی قرار گیرد. هدف از این مطالعه بالینی کنترل شده، بررسی تاثیر پی آر پی بر تولید کلاژن و جوان سازی پوست (و تغییرات کلاژن) با تجزیه و تحلیل بافت شناسی کلاژن پوستی بود.

مواد و روش ها

این مطالعه یک مطالعه بالینی آینده نگر، تک مرکز، تک دوز، برچسب باز، غیر تصادفی کنترل اثرات PRP بر روی کلاژهای پوستی بود. بیمارانی که از سالهای سپتامبر 2013 تا دسامبر 2013، در بخش پوست، بیمارستان نظامی اسکیشهر، ترکیه با پیری پوست تشخیص داده شدند، در این مطالعه شرکت کردند.

تأیید اخلاقی از پژوهشهای کلینیکی دانشگاه اسکیشهر اوسمانگازی، کمیته اخلاق بدست آمد (29 اوت 2012 ؛ شماره پروتکل ، 2012/195). تصویب هیئت بازنگری نهادی (IRB) از دانشگاه Eskisehir Osmangazi بدست آمد. پروتکل مطالعه مطابق با رهنمودهای اخلاقی اعلامیه هلسینکی انجمن جهانی پزشکی است.

بیماران

بیست خانم داوطلب سالم که نیاز به جوان سازی پوست صورت دارند، وارد مطالعه شدند و به صورت رایگان تحت درمان قرار گرفتند. همه آنها از نوع فیتزپاتریک نوع I ~ III داشتند. هیچ یک از بیماران ثبت نام شده مستعد ابتلا به جای زخم هایپرتروفیک و کلوئید نبودند، تحت هرگونه عمل پوستی صورت یا استفاده از رتینوئید موضعی یا سیستمیک قرار گرفته بودند، یا از مواد پرکننده پوستی یا تزریق سم بوتولینوم صورت استفاده کرده بودند.

معیارهای خروج از PRP حاملگی، شیردهی، بدخیمی، خود ایمنی یا بیماری های خونی بود. بیماران توصیفی را در مورد یک مطالعه مروری مطالعه کردند، در مورد مزایا و عوارض جانبی احتمالی درمان مشاوره گرفته و فرم رضایت آگاهانه را امضا کردند.

تهیه و استفاده از PRP

برای تهیه PRP از یک کیت RegenLab® (آزمایشگاه RegenL، لمونت-سور-لوزان، سوئیس) با استفاده از کیت RegenLab® (CE)، یک Conformité Européenne (CE) استریل استفاده شده است. این کیت مجهز به پروانه 21G سوزن بود. کیت vacutainer؛ کلرید کلسیم؛ سرنگ 2 میلی لیتر و سوزن 30 گرم. هشت نمونه خون از ورید محیطی بیمار در لوله های حاوی ضد انعقاد سدیم سیترات آسپیراسیون شد.

لوله آزمایش ویژه 8 میلی لیتری تهیه شد. لوله ها به دستگاه جداكننده مجهز بودند كه سلول هاي قرمز و سفيد را از PRP جدا مي كند. لوله آزمایش در طی 5 دقیقه در 3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شد. از آنجا که لوله‌ها حاوی جداساز مخصوص ژل هستند، گلبولهای قرمز خون از پلاسما در انتهای ژل دور ریختند. پلاکت ها و گلبول های سفید در بالای ژل گلوله قرار گرفته و با مخلوط کردن لوله مجددا در پلاسما معلق شدند. 2 میلی لیتر از تعلیق سلولی PRP نامیده شد. یک سوزن 30 گرم برای تزریق سطحی با استفاده از تکنیک مزوتراپی از نقطه به نقطه استفاده شد. تزریق ها در فاصله حدود 1 سانتی متر از هم قرار گرفتند. تزریق داخل درم پاپیلری (عمق 2.0 2.0 میلی متر) انجام شد. مقدار تزریق 15/0 میلی لیتر در هر تزریق بود. تقریباً 2 میلی لیتر PRP به درم صورت تزریق شد.

بیوپسی پوست

سه بیوپسی پانچ از بیهوشی موضعی از هر بیمار گرفته شد. اولین مورد از ناحیه مادون قرمز راست قبل از درمان به دست آمد. PRP به قسمت فوقانی این ناحیه مادون قرمز راست و تمام صورت تزریق شد. در روز 28 بعد از تزریق PRP و نمک ، بیوپسی پانچ در سایت تحت تیمار PRP و کنترل (منطقه تزریق شور) و بعد از آن تثبیت با 10٪ پارفورمالدئید انجام شد.

ارزیابی بافت شناسی

بخش ها با هماتوكسيلين، ائوزين و لك هاي تيروم ماسون رنگ آميزي شدند. مناطقی با طیف رنگ آبی در بخش رنگ آمیزی تیزروم ماسون به عنوان مناطق غنی از کلاژن (کلاژن) پذیرفته شدند. نسبت ناحیه رنگ آمیزی شده آبی در بیوپسی پوست توسط سیستم آنالیز تصویر سامبا 4000 (سامبا فن آوری، میلان، فرانسه) برای هر قطعه بیوپسی پوست اندازه گیری شد.

علاوه بر این ، حداقل 50٪ از مناطق کلاژن زا با رنگ آبی از نظر شدت رنگ آمیزی آبی اندازه گیری شد و از این اندازه گیریها برای مقایسه اثرات القایی روشهای آزمایش بر تولید کلاژن استفاده شد. برای اندازه گیری شدت کلاژن، مناطق مورد نظر به طور تصادفی با طیف آبی با توجه به عملکرد حداقل 5 میلی متر مربع در هر مورد انتخاب شدند. این طیف به طور تصادفی انتخاب شده مناطق کلاژنی رنگ آمیزی از هر مورد به اندازه گیری چگالی نوری ارائه شد.

میزان نورپردازی مربوط به رنگ برای هر پیکسل در منطقه انتخابی، چگالی نوری یکپارچه (IOD) محاسبه و به تعداد پیکسل کل تقسیم می شود تا به میانگین تراکم نوری (MOD برای هر نمونه برداری از پوست توسط یک سیستم تجزیه و تحلیل تصویر کامپیوتری) برسد. لحن پیوسته پیکسل های رنگ آبی، که نشان دهنده وجود کلاژن است، در منطقه مورد نظر انتخاب شد.

همه پیکسل ها در طیف آبی به مقادیر عددی از صفر به 15 تبدیل شدند (16 مقدار حساسیت). مقادیر موجود در منطقه مورد نظر IOD را نشان می دهد، که ناحیه کلاژن را نشان می دهد. IOD به تعداد پیکسل هایی که برای مقایسه چگالی کلاژن برای هر نمونه برداری به منظور بدست آوردن MOD7 تقسیم شده بودند.

تحلیل آماری

داده های به دست آمده با استفاده از PASW Statistics ver ارزیابی شدند. 18.0 برای ویندوز (شرکت IBM ، آرمونک ، نیویورک ، ایالات متحده). ارقام عددی به دست آمده از اندازه گیری ها به صورت میانگین dev انحراف معیار بیان شده و داده های بدست آمده با شمارش به صورت فراوانی (٪) بیان شده اند. توزیع عادی داده های کمی با استفاده از آزمون Shapiro-Wilk انجام شد.

برای تجزیه و تحلیل همگن واریانس از آزمون لونه استفاده شد. از آزمون تی زوجی در مقایسه با قبل و بعد از مداخله هر گروه استفاده شد. برای تجزیه و تحلیل اهمیت گروهها از آزمون t دانشجویی استفاده شد. نتایج دریک حد اطمینان 95٪ مورد بررسی قرار گرفت ، با فرض p <0.05 به عنوان سطح اهمیت.

نتایج

20 زن در محدوده سنی 40 تا 49 سال (میانگین سنی 43.02 و 43.65) 43 سال) وارد مطالعه شدند. توزیع سنی گروه نرمال بود (تست شاپیرو-ویلک). سن گروه همگن بود (تست لون).

از 20 بیمار، 12 نفر (60.0٪) از نوع پوست فیتزپاتریک II، پنج مورد (25.0٪) از نوع پوست فیتزپاتریک III و سه مورد (15.0٪) از نوع پوست فیتزپاتریک I بودند.

عکسهای قبل از عمل و بعد از عمل بیماران (در یک ماه) ثبت شد، اما ما کارایی درمان PRP را با این عکسها ارزیابی نکردیم. ما فکر می کنیم که ارزیابی بافت شناسی کلاژن مهمتر، قابل اعتماد و هدفمندتر از ارزیابی عکاسی است.

نتایج رنگ آمیزی تریکوم ماسون از نمونه های پوست (شاهد در مقابل شور و محل تزریق PRP) در این نمونه ها مشاهده شد. در سایت های شور و PRP، بسته های فیبر کلاژن موجود در درم نسبت به محل پیش از درمان افزایش یافته است. افزایش در تعداد و ضخامت الیاف الاستیک در PRP و سایت های شور وجود دارد. ما برای اندازه گیری و نشان دادن این افزایش ها از MOD استفاده کردیم.

وزارت دفاع قبل از درمان 2/93 ± 539 (از 406 تا 697) بود. در سمت شور، وزارت دفاع افزایش یافته است 784 4 134.15 (از 591 به 1.081). از طرف دیگر، در آنجا كه از درمان تاثیر پی آر پی بر تولید کلاژن استفاده كردیم، وزارت دفاع به 178 ± 119 (از 674 به 1344 رسید) افزایش یافت. MOD از الیاف کلاژن به وضوح بزرگترین در سمت PRP بود. براي مقايسه قبل و بعد از مداخله هر گروه از آزمون t زوج استفاده شد. افزایش در MOD از الیاف کلاژن پس از تزریق شور و PRP با پایه مقایسه شد. افزایش کلاژن از نظر آماری معنی دار بود (P <0.001).

MOD الیاف کلاژن پس از تیمار نمکی با MOD الیاف کلاژن پس از درمان PRP با آزمون t دانشجویی مقایسه شد. افزایش در سمت PRP از نظر آماری بسیار معنی دار بود (P <0.001).

ما با MOD از قبل از درمان با وزارت درمان شور مقایسه کردیم. در سایت نمکی ، 46.01 درصد پیشرفت مشاهده شد. سپس، ما MOD قبل از درمان را با MOD PRP مقایسه کردیم. در وزارت دفاع PRP ، 89.05 درصد پیشرفت مشاهده شده است.

سرانجام ، ما با مقایسه PRP نسبت به نمک بهبود (PRP- به نمک 89.05 to به 46.01)) در مقایسه با PRP 1.93: 1 بودیم.
هیچ یک از بیماران ما در طول دوره پیگیری از بین نرفتند. برنامه PRP توسط همه بیماران به خوبی تحمل شد. عوارض جانبی جدی ناشی از PRP مشاهده نشد. عوارض خفیف و زودگذر مشاهده شد. عارضه شایع در طول دوره درمان اریتم خفیف (75٪ ، 15 نفر) و احساس سوزش (70٪ ، 14 نفر) بود. تمام این عوارض بطور خودبخود در دوره پیگیری دو روز از بین رفت. کبودی / اکیموز (15٪ ، 3 نفر) و اریتم شدید (10٪ ، 2 نفر) نیز مشاهده شد. در هفت روز پیگیری، کبودی / اکیموز به طور خودبخود ناپدید شد. درد تکنیک مزوتراپی “نقطه به نقطه” توسط کلیه بیماران دارای کرم بی حسی EMLA 5٪ (2.5٪) تحمل شد.

بحث

استفاده از PRP در پزشکی زیبایی شناسی نیز شناخته شده است، اگرچه تعداد کمی از مطالعات به طور خاص نشان دهنده مزایایی در جوان سازی پوست صورت و گردن است. PRP یک آماده سازی اتولوگ پلاکت ها در پلاسمای غلیظ است. غلظت بهینه پلاکت PRP نامشخص است. PRP حاوی ترکیبی از مواد فعال زیستی است که از پلاکت ها و پلاسما مشتق شده اند.

فاکتورهای رشد مختلف، از جمله فاکتور رشد مشتق از پلاکت (PDGF)، فاکتور رشد (TGF) تبدیل کننده، فاکتور رشد عروقی اندوتلیال عروقی (VEGF) و فاکتور رشد شبیه انسولین (IGF) از سلولهایα- گرانول پلاکتهای غلیظ ترشح می شوند. توسط القاء تجمعات4. بیش از 30 ماده فعال زیستی در این گرانولهای α وجود دارد. فیبروبلاستها گیرنده های سطحی متعددی را بیان می کنند و همزمان می توانند مولکولهای متعددی را که باعث واکنشهای رفتاری می شوند، حس کنند.

فاکتورهای رشد و سیتوکینهای متنوعی که تجمع ماتریکس خارج سلولی (ECM) را تسهیل کرده و تکثیر سلولی و تمایز سلول را بهبود می‌بخشد، پس از تزریق در بافت هدف فعال می شوند. بازسازی بافت ناشی از تکثیر سلولی، آنژیوژنز و مهاجرت سلولی است. پروتئین های متالوپروتئیناز ماتریس (MMP) با تخریب پروتئین های کلاژن و ECM در فرآیند پیری نقش دارند.

کیم و همکارانش در مورد بازسازی ECM و تاثیر پی آر پی بر تولید کلاژن، فرایندی که نیاز به فعال شدن فیبروبلاست پوستی دارد، که برای جوانسازی پوست سالخورده ضروری است، تحقیق کردند. آنها دریافتند که PRP بیان کلاژن نوع I ، MMP-1 و mRNA را در فیبروبلاستهای پوستی انسان افزایش می دهد. PRP سنتز کلاژن جدید توسط فیبروبلاستها را القا می کند. كاکودو و همكاران نشان دادند كه افزودن پلاسمي غني از پلاكت و پلاكت ضعيف پلاكتي باعث افزايش معني دار سلول هاي بنيادي مشتق از چربي انسان و فيبروبلاست پوستي انسان در كشت سلول مي شود.

آنها پیشنهاد كردند كه PRP می تواند باعث افزایش سلول های بنیادی پوستی و فیبروبلاست پوستی در انسان شود. چو و همکاران اثر PRP را ارزیابی کرد. آنها نشان می دهند که PRP باعث افزایش بیان کلاژن نوع I ، MMP-1 و MMP-2 در فیبروبلاست‌های پوست انسان می شود. در مطالعه دیگر، کاکودو و همکارانش یک آزمایش جانبی به صورت جانبی (نیمه جانبی) بین سمت تحت درمان با PRP و کنترل (درمان نشده) یک سایت اهداکننده پیوند پوست با ضخامت شکاف بررسی کرده و تعداد روزها را مقایسه کردند. تا زمان اپیتلیالیزاسیون و درد هنگام تغییر گاز.

آنها نشان دادند که PRP باعث افزایش اپیتلیالیزاسیون و آنژیوژنز سایتهای اهداکننده پیوند پوست با ضخامت تقسیم می شود. این مطالعات تجربی (در شرایط آزمایشگاهی) نشان می دهد که PRP بهبود زخم را با تکثیر فیبروبلاست، سنتز کلاژن، رگ زایی و اپیتلیالیزاسیون بهبود می بخشد. شین و همکارانش PRP را با لیزر درمانی فراکشنال ترکیب کردند و با گروه کنترل مقایسه کردند. آنها گزارش دادند كه PRP همراه با ليزر كسري باعث افزايش رضايت از سوژه و خاصيت ارتجاعي پوست، ميزان كلاژن و تعداد فيبروبلاستها مي شود. یوکسل و همکاران.

تأثیر PRP در پوست صورت انسان بررسی شده است. آنها به PRP با استفاده از تزریق درمولر و تزریق داخل پوست اقدام کردند. آنها بیماران را از نظر بافت شناسی ارزیابی نکردند. آنها نتیجه گرفتند که PRP مؤثر و ایمن است. در مطالعه حاضر، ما کلاژن بیماران با سطح کلاژن پایه و کنترل را مقایسه کردیم. در سمت PRP ، پیشرفت چشمگیری از داده های پایه در هفته 4 مشاهده شد. PRP مؤثر تلقی شد، به طور قابل توجهی باعث بهبود کلاژن می شود. نتایج ما با مطالعات قبلی قابل مقایسه است. این نتایج مهم است زیرا این مطالعه نشان دهنده یک مطالعه بالینی کنترل شده بالینی (in vivo) پیر شدن پوست است.

به بهترین دانش ما، ارزیابی بافت شناختی از اثر مستقل PRP در جوان سازی صورت در مطالعه قبلی، در داخل بدن، پیدا نبود.
هنوز هیچ روش قطعی برای استفاده بالینی از PRP وجود ندارد. بعضی از نویسندگان برای دستیابی به بهترین نتیجه سه درمان انجام داده اند. در این مطالعه، PRP فقط یک بار استفاده شده است. در روز 28 پس از تزریق PRP و نمک ، بیوپسی پانچ در سمت تحت درمان با PRP و شاهد (منطقه تزریق شور) انجام شد و ارزیابی شد. نتایج این مطالعه تنها یک کاربرد PRP را نشان می دهد. به نظر می رسد حتی یک برنامه کاربردی نیز مؤثر است. تکرار درمان PRP ممکن است منجر به افزایش سنتز کلاژن شود.

او اظهار داشت که سوزن اطراف می تواند حالت پیری پوست را تغییر دهد، احتمالاً با تقویت فعالیت فیبروبلاست در پوست و افزایش محتوای کلاژن محلول. سوزن پوستی (میکرو سوزن) روشی است که شامل استفاده از یک درمولر استریل است که با یک سری سوزن های تیز و تیز پوست را سوراخ می کند. پوست چندین میکروب کبود در درم ایجاد می کند که آبشارهای پیچیده ترمیم زخم ها و ترشح فاکتور رشد را آغاز می کند و سرانجام منجر به تولید کلاژن می شود. نکته مهم دیگر مطالعه ما بود.

در این مطالعه سطح کلاژن در قسمت کنترل (سمت تزریق شور) با سمت قبل از درمان مقایسه شده است. از نظر آماری تفاوت معنی داری بین سطح تزریق شده با نمکی و سطح اولیه (درمان نشده) با کلاژن مشاهده نشد. دلیل بالا رفتن سطح کلاژن در سمت تزریق شده شور ، اثر سوزن پوست است.

عوارض جانبی مانند کبودی خفیف / اکیموز / هماتوم، تورم گاه به گاه، اریتم خفیف یا طولانی مدت، احساس سوزش و به ندرت عفونت گزارش شده است. هیچ عارضه جانبی جدی یا مداوم گزارش نشده است. Redaelli و همکاران 1 اظهار داشتند که اریتم خفیف احتمالاً به دلیل کلرید کلسیم رخ داده است. در این مطالعه عوارض خفیف و زودگذر مانند کبودی / اکیموز، احساس سوزش، اریتم خفیف و اریتم شدید مشاهده شده است. ما به دلیل PRP هیچ عارضه جانبی جدی را مشاهده نکردیم. ما در نظر گرفتیم که PRP یک انتخاب ایمن به عنوان یک روش آرایشی برای جوان سازی پوست صورت است.

در نتیجه ، PRP سطح کلاژن پوستی را نه تنها از نظر فاکتورهای رشد بلکه با سوزن پوستی افزایش می دهد (روش مزوتراپی “نقطه به نقطه”). برنامه PRP می تواند به عنوان یک روش مؤثر (حتی یک برنامه واحد) و ایمنی برای جوان سازی پوست صورت در نظر گرفته شود.

نتیجه

PRP سطح کلاژن پوستی را نه تنها توسط فاکتورهای رشد بلکه با سوزن پوستی افزایش می دهد (روش مزوتراپی “نقطه به نقطه”). برنامه PRP می تواند به عنوان یک روش مؤثر (حتی یک برنامه واحد) و ایمنی برای جوان سازی پوست صورت در نظر گرفته شود.